Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1HG糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现家兔自身特异性到再次出现1改型白血病医学腹泻的十分困难亲率在婴幼儿末期就有很好的详细描述，多个家兔自身特异性白血病的婴幼儿中都有70%在血清叠加后10年内患上白血病，而随访15年的婴幼儿这一比率降低到84%。适度而言，占医学1改型白血病一半以上的改型1改型白血病的得病机制还没有想得到充分的科学研究。

越来越多的人开始用作分期系统来并不一定1改型白血病的十分困难：个微在再次出现多种家兔自身特异性时重回第1阶段，再次出现血糖异常时重回第2阶段，再次出现腹泻时重回第3阶段。一些多发家兔自身特异性白血病的个微，在1期和2期，十分困难较更慢，并发展为得病的1改型白血病。我们以后详细描述了一四组在首次检测到多种家兔自身特异性结果显示后至少10年无白血病的却是更慢十分困难者，这四组病人人数少，但外观上非常明确。随后，我们见到家兔自身抗原特异性CD8+T蛋白质重排在十分困难较为更慢的病人中都基本不不存在，但在近期得病和则有的白血病病人中都很容易检测到。这可能会证明，与十分困难病人比起，这些病人免疫性重排的调节增强。

以前科学研究证明，尽管调节性T蛋白质(Treg)数量正常，但白血病病人不存在一些机制不足之处，其中都都有对IL-2的重排灵活命性降低。此外，白血病病人中都的波动CD4+T蛋白质可能会对调节颇具抵抗性，表现为波动T蛋白质的减缓消散，其本质造成的Treg和微外造成的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T蛋白质中都IL-2重排消散。本科学研究的目的是详细描述了CD4+调节性T蛋白质(Treg)在一小群却是较为更慢十分困难者中都的外观上，他们的平均比率为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群为基础的纵向科学研究，在21岁以下确诊的病人子女中都检查1改型白血病的脆弱因素。我们以后详细描述了长期较为更慢十分困难者的外观上，他们保持多重家兔自身特异性白血病最多10年，但没有再次出现白血病的医学腹泻，更慢性或非完成性免疫性。随后，10名继续保持无白血病并愿意包括大量肠道结果显示的较为更慢十分困难者设为T和B蛋白质机制量化。在目前的科学研究中都，8名更慢十分困难者(SP四组)，中都位比率43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身特异性白血病。所有的四组织者都处于1改型白血病十分困难的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身特异性对某些抗原的白血病重排，然而，一名病人已经处于2期至少6年，但没有再次出现医学腹泻，一名病人被诊断为白血病，该受试者72岁，在通过观察实验结果显示时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据量化中都对该供微完成了另行评量。分离外周血单个核蛋白质(PBMCs)，采用多参数流式蛋白质术和T蛋白质减缓试验评量供微中都Treg的频带、表改型和机制。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)完成无监督聚类量化，评量Treg表改型。

结果：与健康供微比起，来自更慢十分困难微的梦境CD4+T蛋白质的监督聚类说明了，触发的梦境CD4+ Treg频带降低，与糖皮质激素诱导的TNFR具微蛋白(GITR)忽略降低有关。一名HbA1c消退的病人与十分困难较为更慢者和匹配的对照四组比起，Treg谱有所不同。机制量化证明，与健康供微比起，来自较为更慢十分困难微的Treg介导的CD4+波动T蛋白质减缓明显毁损。表现为对波动CD4+T蛋白质CD25和CD134忽略的减缓降低。

左图1 深入的表改型量化说明了，CD4+Treg亚改型在更慢十分困难队列中都降低。由FlowSOM分解成的Treg二楼，聚集在来自所有供微的活命CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标记物忽略鉴定出10个元簇:梦境T蛋白质_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T蛋白质;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用作9个不同Treg标记分解成的10个元簇的MST。每个数据流值得一提的是一个集群(100个集群)，非常大的元集群(10个元集群)在数据流四组周围手绘。每个数据流中都的煎饼左图回不应单个标记的忽略级别。(b)每个元聚类的热左图，以说明了整微标记忽略。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)分解成左图，以及FlowSOM标识的每个元簇的覆盖物。(e-l)相对重元素为每个metacluster盒直通左图(重元素> 0.05%)确定为HD和SP四组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T蛋白质(l)。绿色圆点值得一提的是捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 用作CITRUS的预测模改型断定，Treg频带的降低是十分困难较为更慢的标志。国际标准去却是化(a - f)和果树量化(g-k)较为SP四组织者和匹配的HD四组织者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的值得一提的是性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR忽略完成分离，模拟FlowSOM群微。(b) HD(横纹)和SP(杂色)四组以及供微SP 606(绿色)中都CD25+ cd127的频带汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去却是化子集的盒直通左图;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3忽略风速著色，上标厚实的簇被标识为SP和HD队列之间的不同。(j)盒直通左图说明了了在SP(杂色)和HD(灰点)四组中都，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对重元素(比率)。(k)直方左图说明了每个簇的表改型(粉红色)和Treg标记相对忽略与取材忽略(金色);上列，CPUTreg_3;上面一行，CPUTreg_4。取材与所有其他簇中都标记的忽略有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩检验

左图3 与健康献血者比起，十分困难较为更慢者梦境treg的GITR降低。每个梦境CD4+T蛋白质元簇(梦境T蛋白质_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T蛋白质;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个忽略标记的变动。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的忽略热左图(sp606不都有在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR忽略串联，说明了直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon一对一符号秩和检验，p< 0.07(绿色)所有供微都有，p< 0.05(金色)供微SP 606和匹配的HD不都有在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR忽略，从国际标准去却是化，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(绿色)串联，说明了直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一符号秩检验

左图4 来自较为更慢十分困难的CD4+ treg蛋白质控制波动CD4+T蛋白质的灵活命性降低。SP四组用金色的直通和圆点回不应，HD四组用红色的直通和圆点回不应，绿色的直通/圆点回不应供微sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质完成分选。CD4+CD25−(此番者)被标记为CFSE, Treg按仔细观察的比率校准。用抗CD3 /28微珠重置蛋白质，培植3天后完成流式蛋白质术检测。(a-d)与CD4+此番者相对不应的treg培植(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培植。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE减缓%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓%-。用作白血病对照(触发的响不应蛋白质不含treg)计算减缓%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

左图5 波动CD4+T蛋白质对较为更慢十分困难的T蛋白质重置的减缓非常引人注意。SP四组用金色的直通和圆点回不应，HD四组用红色的直通和圆点回不应，绿色的直通/圆点回不应供微sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质完成分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标记，treg按仔细观察的比率校准。用抗CD3 /28微珠重置蛋白质，培植3天后完成流式蛋白质术(CD25反染)和蛋白质因子量化。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同培植。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE减缓百分亲率(b)。(c,d) CD25减缓百分亲率(c)和CD134减缓百分亲率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中都的忽略。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重较为测试

正确性：我们得出的正确性是，来自较为更慢十分困难子的重置梦境CD4+Treg在GITR忽略中都想得到了扩展和独特，忽略了进一步科学研究Treg在1改型白血病风险个微中都的异质性的重要性。

原文不应是：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28